1.项目介绍
免疫电镜（IEM）是将免疫细胞化学技术与电镜超微结构观察相结合的一种检测方法。组织样品经低温脱水、LR White 树脂低温聚合包埋后，制备 70–80 nm 超薄切片。采用特异性一抗与待检测抗原结合，再以胶体金标记的二抗与一抗-抗原复合物结合，在电镜下观察。二抗上的胶体金颗粒形成特征性电子密度，从而精确指示相应抗原在亚细胞水平上的定位。
2.样品要求
免疫电镜成功的关键在于：① 细胞超微结构的完好保存；② 抗原在原位且抗原性不受损失；③ 免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合。该技术主要用于病毒、细菌等抗原定位、免疫性疾病发病机制及超微结构免疫细胞化学研究。
具体操作方法：
2.1 取样：在 1–3 分钟内完成取样，组织块大小约为 1 mm³。取材前准备装有免疫电镜固定液 A 液的培养皿，将离体小组织块立即投入培养皿内，用手术刀在固定液中切割成 1 mm³ 的小块，再转移至装有新鲜免疫电镜固定液的 EP 管中继续固定。
2.2 取材部位：尽量精确取至目的部位（如观察肾小球取肾皮质，观察胰岛取胰岛丰富的胰尾；皮肤、肠胃等在固定液中易打卷的组织，可将组织粘于滤纸上进行固定）。
2.3 避免机械损伤：取材时避免镊子挤压等机械损伤，刀片需锋利，防止挫伤组织。
2.4 固定与运输：组织取下后立即投入免疫电镜专用固定液，4℃ 保存，4℃ 冰袋运输。保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。样品固定后应尽快安排后续包埋及免疫标记实验，以减少抗原丢失。
2.5 结果观察：在透射电镜下观察并采集图像。黑色、大小为 10 nm 的金颗粒即为阳性表达信号。
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